应用领域:
随着分子生物学的理论及技术方法(特别是重组DNA技术)的迅速发展,人们可以在实验室构建各种载体、克隆及分析目标基因,使疾病深入至分子水平研究,于是诞生了基因诊断、基因治疗技术。
基因治疗从基因角度理解是对缺陷的基因进行修复增补,或将正常有功能的基因置换的方法。 从治疗角度理解是一种基于导入遗传物质以改变患者细胞的基因表达从而达到治疗或预防疾病的目标的新措施。
当代基因治疗研究的热门方法是将外源基因DNA或RNA片段导入靶细胞或组织,研究靶基因的上调或抑制情况。例如,有些异常基因(癌基因、病毒基因),可通过反义核酸技术引入外源片段将其抑制;有些基因本身有治疗作用,体外合成该基因导入体内使其表达丰度提高。
故选择合适高效的基因导入介质系统尤为关键。而病毒载体已成为当前基因治疗载体研究的热点,其优势在于:
1、病毒包装技术经历了多年的研究,已趋于成熟,可用于产业化大量生产。
2、病毒基因组的结构简单、分子背景比较清楚,稳定易于改造、易于制备。
3、病毒的宿主范围广,且具有高效的靶向特异性。
4、在目的基因表达方面相对于脂质体介导的效果更明显、长时、稳定。
5、通过载体改造的方式形成了复制缺陷型结构,安全性高。
腺病毒表达系统 | 慢病毒表达系统 | 逆转录病毒 | |
病毒基因组成 | 双链DNA | 单链RNA | 单链RNA |
载导容量 | < 8 kb | < 5 kb | < 6 kb |
基因整合功能 | 无。病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 | 有。病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因 | 有。 |
表达丰度 | 高 | 中 | 中 |
表达时间 | 快(1-2天) | 慢(2-4天) | 快(1-2天) |
感染细胞类型 | 分裂和不分裂细胞 | 分裂和不分裂细胞。适用于难转染细胞 | 感染分裂细胞,但在干细胞中表达效率低 |
滴度TU/ml | 10^12 | 10^9 | 10^9 |
四环素诱导系统 | 不可以 | TET-ON , TET-OFF | 不可以 |
毒性作用 | 细胞毒性 | 遗传毒性 | 遗传毒性 |
免疫原性 | 高免疫原性 | 低免疫原性 | 低免疫原性 |
动物模型 | 不能得到转基因动物 | 可产生转基因动物,效率达50以上 | 可以,但很难 |
安全系数 | 高 | 高 | 中 |
能否用于MIRCORNA | 可以 | 可以 | 不可以 |
RNAi | 病毒进入细胞往往引起细胞内干扰素反应,不适合做RNAi实验 | 适合,是RNAi实验的优选工具 | 可以用作RNAi实验 |
基因过表达 | 包装容量较大。可以满足较大基因的包装,是过表达基因的优选工具 | 包装容量有限,过表达的基因过大时,病毒滴度受到影响 | 包装容量有限,过表达的基因过大时,病毒滴度受到影响 |
常见应用 | 1、体外细胞基因转导 2、基因治疗 | 1、体外细胞基因转导 2、基因治疗 | 1、体外细胞基因转导 2、全基因组插入失活突变筛选 3、功能基因库构建 |
云海生物:
慢病毒包装 1E+8/ml:5160元,5E+8是18390元 3-4周 (每毫升病毒上清中含有至少一到五乘十的八次方个活性病毒颗粒)
慢病毒包装 1E+9/ml:6360元,5E+9是22660元 3-4周 (第一次订1ml是6360元,后面再订同序列就是6000元每ml)
用量:滴度若达到1X109 TU/ml,尾静脉注射300-500ul,只需注射一次,半个月后处死大鼠检测相应指标。1X109 TU/ml,大概能注射2-5只大鼠。
案列:
病毒类型 | 基因名称(请注明物种信息) | 载体类型 | 序列(5'-3') (Accession number/Gene ID) | 订购量(ml) | 分装 (ul/管) | 滴度要求 | 特殊说明 | |
慢病毒 | xxxx | 2-3ml | 200 | 10^9 | 干扰,提供模板质粒附详细说明 | |||
1.载体类型需要确认;2.RNA序列可以通过专业网站查找;3. 试验对象大鼠6-8只,1*10^9/ml病毒大概可以注射2-5只,订购量2-3ml可以满足试验要求,分装每管200ul; 4. xxx试验还需6-8只大鼠阴性对照(这是另外收费的),大概也需要2-3ml; 5.本实验为干扰实验。 | ||||||||
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