本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中提取多至 8 μg DNA（70bp-10Kb），回收率为60-85%。琼脂糖凝 胶在温和的缓冲液(DE-A 溶液)中溶解，其中的保护剂能防止线状DNA 在高温下降解，然后在DE-B 溶液 的作用下使DNA 选择性结合到膜上。纯化的DNA 纯度高，并保持片断完整性和高生物活性，可直接用于 连接、体外转录、PCR 扩增、测序、微注射等分子生物学实验。注意事项： 1. 在步骤1 中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间（线型DNA 长时间暴露在高温条件 下易于水解），从而提高回收率。勿将含DNA 的凝胶长时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA 造成的损伤。 2. 在步骤2 中凝胶必须完全熔化，否则将严重影响DNA 回收率。 3. 将Eluent 或去离子水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。 4. DNA 分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5 洗脱液中保存。实验准备: 1. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。 2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。 3. 准备75°C水浴。 4. 使用前，检查Buffer DE-B是否出现沉淀，若出现沉淀，应于70°C温浴加热溶解并冷却至室温后再 使用。操作步骤：1. 在紫外灯下切下含有目的DNA 的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量（提 前记录1.5 ml 离心管重量），该重量作为一个凝胶体积（如100 mg=100 μl 体积）。 2. 加入3 个凝胶体积的Buffer DE-A，混合均匀后于75°C 加热（低熔点琼脂糖凝胶于40°C 加热），间 断混合（每2-3 min），直至凝胶块完全熔化（约6-8 min）。 3. 加0.5 个Buffer DE-A 体积的Buffer DE-B，混合均匀；当分离的DNA 片段小于400bp 时，加入1 个凝胶体积的异丙醇。步骤 4-6 可以选择负压法或离心法。 A. 负压法 4A. 正确连接负压装置，将DNA 制备管插到负压装置的插口上。吸取步骤3 中的混合液，转移到 制备管中，开启并调节负压至-20-30 英寸汞柱，缓慢吸走管中溶液。 5A. 加500 μl Buffer W1，吸尽管中溶液。 6A. 加700 μl Buffer W2，吸尽管中溶液。以同样的方法再用700 μl Buffer W2 洗涤一次。 * 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 * 两次使用Buffer W2 冲洗能确保盐份被完全清除，消除对酶切反应的影响。 7A. 将制备管置于2 ml 离心管（试剂盒提供）中，12,000×g 离心1 min。B. 离心法 4B. 吸取步骤3 中的混合液，转移到DNA 制备管（置于2 ml（试剂盒内提供）离心管）中，12,000×g 离心1 min。弃滤液。 5B. 将制备管置回2 ml 离心管，加500 μl Buffer W1，12,000×g 离心30 s，弃滤液。 6B. 将制备管置回2 ml 离心管，加700 μl Buffer W2，12,000×g 离心30 s，弃滤液。以同样的方法 再用700 μl Buffer W2 洗涤一次12,000×g 离心1 min。 * 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 * 两次使用Buffer W2 冲洗能确保盐份被完全清除，消除对酶切反应的影响8. 将制备管置于洁净的1.5 ml 离心管(试剂盒内提供)中，在制备膜中央加25-30 μl Eluent 或去离子 水，室温静置1 min。12,000×g 离心1 min 洗脱DNA。 * 将Eluent 或去离子水加热至65℃将提高洗脱效率。
