本试剂盒采用改进的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜选择性的吸附DNA的方法达到快速纯化质粒DNA的目的。适合于从1-4ml细菌培养物中提取多至20ug高纯的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译，限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。注意事项：Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼睛，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗，必要时寻求医疗治疗。实验准备：1.第一次使用前，RNaseA全部加入Buffer S1中，4℃贮存。 2.准备无核酸和核酸酶污染的Tip头，离心管。 3. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。 4.使用前，检查Buffer S2是否出现沉淀，应用于37℃温浴加热溶解并冷却至室温后再使用。操作步骤： 第一次使用时，将试剂盒携带的RNase A全部加入到Buffer S1 中，混合均匀，4°C贮存。1. 取1-4 ml 在LB 培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少）， 12,000×g 离心1 min，弃尽上清。 2. 加250 μl Buffer S1 悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。 * 确认Buffer S1 中已加入RNase A。 3. 加250 μl Buffer S2，温和并充分地上下翻转4-6 次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。 此步骤不宜超过5 min。 * Buffer S2 使用后立即盖紧瓶盖，以免空气中的CO2 中和Buffer S2 中的NaOH，降低溶菌效率。 * 避免剧烈摇晃，否则将导致基因组DNA 的污染。 * 此步骤不宜超过5 min。 4. 加350 μl Buffer S3，温和并充分地上下翻转混合6-8 次，12,000×g 离心10 min。 * 避免剧烈摇晃，否则将导致基因组DNA 的污染。步骤 5～7 可以选择负压法或离心法纯化质粒DNA。 A. 负压法 5A. 将质粒DNA 制备管插到负压装置的接口上。吸取步骤4 中的离心上清并转移到制备管中，开 启并调节负压至-20-30 英寸汞柱，缓慢吸走管中溶液。 6A. 加500 μl Buffer W1，吸尽管中溶液。 7A. 加700 μl Buffer W2，吸尽管中溶液；以同样的方法再用700 μl Buffer W2 洗涤一次。 * 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 * 两次使用Buffer W2 冲洗能确保盐份被完全清除，消除对酶切反应的影响。 8A. 将制备管置于2 ml 离心管（试剂盒内提供）中，12,000×g 离心1 min。 B. 离心法 5B. 吸取步骤4 中的离心上清并转移到制备管（置于2 ml 离心管（试剂盒内提供）中），12,000×g 离心1 min，弃滤液。 6B. 将制备管置回离心管，加500 μl Buffer W1，12,000×g 离心1 min，弃滤液。 7B. 将制备管置回离心管，加700 μl Buffer W2，12,000×g 离心1 min，弃滤液；以同样的方法 再用700 μl Buffer W2 洗涤一次。弃滤液。 * 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 * 两次使用Buffer W2 冲洗能确保盐份被完全清除，消除对酶切反应的影响。 8B. 将制备管置回2 ml 离心管中，12,000×g 离心1 min。 9. 将制备管移入新的1.5 ml 离心管（试剂盒内提供）中，在制备管膜中央加60-80 μl Eluent 或去离子 水，室温静置1 min。12,000×g 离心1 min。 * 将Eluent 或去离子水加热至65℃将提高洗脱效率。
